1．酶標(biāo)記
在蛋白質(zhì)芯片中常用的標(biāo)記酶有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，AP)、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(glueose 6-phosphate-dehydrogenase，G6PD)、β-D-半乳糖苷酶(fi_galactosidase，β-Gal)等。其中HRP由于比活性高、價(jià)廉易得、獲得方便等優(yōu)點(diǎn)，在蛋白質(zhì)芯片檢測(cè)酶標(biāo)記中最為常用。酶標(biāo)記抗原(抗體)的方法主要有兩種，一種是直接法，另一種是交聯(lián)法。直接法是用過碘酸鈉使酶分子表面的多糖羥基氧化成醛基，醛基可以和抗體(抗原)中的游離氨基反應(yīng)形成Schiff堿，然后用硼酸化鈉終止反應(yīng)，從而實(shí)現(xiàn)酶與蛋白質(zhì)分子(抗原或者抗體)的結(jié)合。這種方法僅適用于含糖基酶標(biāo)記物的制備，其他酶不適用。交聯(lián)法是通過雙功能交聯(lián)劑將待標(biāo)記的酶與蛋白質(zhì)分子(抗原或者抗體)連接在一起。根據(jù)交聯(lián)劑上反應(yīng)基團(tuán)類型是否相同，可將交聯(lián)劑分為兩種：一類是同源雙功能交聯(lián)劑，如戊二醛、苯二馬來酰胺，另一類是異源雙功能交聯(lián)劑，如羥琥珀酰亞胺酯。目前還有很多商品化的試劑可以購買得到。
2．熒光物標(biāo)記
熒光免疫分析中常用的熒光物質(zhì)有異硫氰酸熒光素、丹磺酰氯、若丹明B-異硫氰酯、Cy3、Cy5等。普通的熒光標(biāo)記有許多不足之處，如熒光基團(tuán)的熒光壽命較短，檢測(cè)時(shí)本底熒光信號(hào)的干擾大，檢測(cè)時(shí)不能將發(fā)射光中散射的激發(fā)光有效地去掉，而時(shí)間分辨熒光免疫分析(time-resolved fluoro-immunoassay，TRFI-A)技術(shù)以鑭系元素為標(biāo)記物，利用波長和時(shí)間兩種單位分辨，有效地克服了普通熒光標(biāo)記的諸多不足，大大提高了檢測(cè)分析的靈敏度。目前，在蛋白質(zhì)芯片的檢測(cè)中常用的熒光標(biāo)記物是Cy3及Cy5兩種物質(zhì)。而且這兩種物質(zhì)在一般的試劑公司都能購買。
3．化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記
常用的化學(xué)發(fā)光物有吖啶酯或吖啶磺酰胺鹽，吖啶酯或吖啶磺酰胺鹽可共價(jià)結(jié)合于蛋白質(zhì)分子(抗原或者抗體)上，標(biāo)記好的蛋白質(zhì)分子(抗原或者抗體)與對(duì)應(yīng)物結(jié)合后，用啟動(dòng)發(fā)光試劑(NaOH+H2O2)與吖啶酯或吖啶磺酰胺鹽作用從而產(chǎn)生可檢測(cè)的光信號(hào)。 |
