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自HIV病毒被發(fā)現(xiàn)以來，艾滋病在全球范圍內(nèi)的傳播趨勢日益嚴重，為科研和預防工作提出了嚴峻的考驗。HIV-1 p24抗原的高靈敏度檢測，在過去的十幾年里得到了不斷的改進和提高，并作為縮短窗口期、提高檢測靈敏度的檢測體系引入到了第四代抗體檢測方法中去，為艾滋病的預防和檢驗，病毒感染情況的監(jiān)測，艾滋病患者病情的控制及用藥的效果研究都起到了應有的重要作用。 將化學發(fā)光體系引入到p24抗原檢測方法中來，以吖啶酯作為發(fā)光試劑，以雙抗夾心法為原理，建立HIV-1 p24抗原的化學發(fā)光免疫分析方法。將檢測靈敏度提高到fg級的水平；具有反應時間短，靈敏度高，操作簡單，費用低廉，不影響抗原抗體生物學活性等優(yōu)點。對于HIV-1 p24抗原檢測方法的改進有很好的理論和實際意義。 將吖啶酯作為化學發(fā)光試劑對抗p24抗體進行直接標記，標記比率為1.46。標記吖啶酯的抗體作為檢測抗體同包被抗體一起組成了雙抗夾心抗原檢測體系，建立了基于吖啶酯標記抗體的p24抗原化學發(fā)光免疫分析方法。 為了進一步優(yōu)化實驗，設計了一系列正交實驗，對封閉蛋白及Tween-20去污劑的應用進行了深入的研究。其中，以牛血清白蛋白同酪蛋白進行比較，前者的封閉效果更為理想；在分析緩沖液中加入封閉蛋白將有利于減少非特異性信號；分析緩沖液中加入Tween-20，但在第三次洗滌的緩沖液中不加入Tween-20有利于較高信噪比。 此后，從方法學的角度對該方法進行了分析靈敏度、功能靈敏度、檢測寬度等多方面的評價，并同常用的酶聯(lián)免疫分析方法進行了比較。HIV-1 p24抗原吖啶酯化學發(fā)光免疫分析方法的功能靈敏度為0.5pg/ml，比普通的ELISA方法低1-2個數(shù)量級；分析靈敏度為0.5pg/ml；線性范圍在0.5 pg/ml-100ng/ml，比普通的ELISA方法高1-2個數(shù)量級；HIV-1 p24抗原吖啶酯化學發(fā)光免疫分析方法與普通的ELISA檢測方法具有很好的相關(guān)性，在P≤0.01情況下，相關(guān)系數(shù)為0.951。 同時，以HIV-1 p24抗原吖啶酯化學發(fā)光免疫分析方法為模型，對吖啶酯化學發(fā)光免疫分析方法的標準曲線擬合方式進行了探討。選取了一元三次曲線、一元3/2次曲線、Logit-log曲線和四參數(shù)logistic曲線等四種擬合模型，通過R<'2>值與信號值回代誤差系數(shù)對四種方法進行綜合比較，找出最為適合的擬合方式。從整體和局部兩個方面進行綜合分析，四參數(shù)logistic曲線擬合方式對于p24吖啶酯化學發(fā)光免疫分析方法的標準曲線擬合是最為理想的選擇。